|   别称

Flag-tag

|   Flag-tag 简介

FLAG 标签，或 FLAG 八肽，或 FLAG 表位，是一种多肽蛋白质标签，可以用重组 DNA 技术添加到蛋白质中，其序列图案为 DYKDDDDK（其中 D=天冬氨酸，Y=酪氨酸，K=赖氨酸）。它是最特异的标签之一，是一种通用种属工抗原，已经开发出特异的、高亲和力的单克隆抗体，因此可用于亲和层析法的蛋白质纯化，也可用于定位活细胞内的蛋白质。它已被用于分离重组的、过量表达的蛋白和宿主生物体表达的野生型蛋白。它还可用于分离具有多个亚单位的蛋白质复合物，因为其温和的纯化过程往往不会破坏这种复合物。它已被用于获得足够纯度和质量的蛋白质，以通过 X 射线晶体学进行三维结构测定。FLAG 标签可用于许多需要抗体识别的不同检测中。如果没有针对某一特定蛋白的抗体，在蛋白上添加 FLAG 标记，就可以用针对 FLAG序列的抗体来研究该蛋白。例如通过免疫荧光、免疫沉淀或通过 SDS PAGE蛋白电泳和 Western 印迹检测进行细胞定位研究。从 N 端到 C 端的 FLAG标签的肽序列是。DYKDDDDK（1012Da）。此外，它还可以串联使用，常见的是 3xFLAG 肽。DYKDHD-G-DYKDHD-I-DYKDDDDK（最后一个标签编码一个肠激酶裂解位点）。它可以与蛋白质的 C 端或 N 端融合，或插入到蛋白质内。一些市售的抗体（如 M1/4E11）只有在 N 端出现时才能识别该表位。然而，其他可用的抗体（如 M2）则对位置不敏感。FLAG 标签中的酪氨酸残基可以被硫酸化，这可能会影响抗体对 FLAG 表位的识别。FLAG 标签可以与其他亲和力标签一起使用，例如多组氨酸标签（His 标签）、HA 标签或 myc 标签。

|   特异性

可检测样本中通用种属的Flag-tag，且与其类似物无明显交叉反应。

|   典型数据及参考曲线

由于实验操作条件的不同（ 如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

|   重复性

板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%

|   回收率

在选取的健康通用种属细胞裂解液、细胞培养上清、中加入3个不同浓度水平的通用种属Flag-tag，计算回收率

|   线性稀释

分别在选取的4份健康通用种属细胞裂解液、细胞培养上清、中加入高浓度通用种属Flag-tag，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。

注：ELISA试剂盒检测范围等数据，因检测样本 的不同而调整，实际数据以随货说明书为准。

|   ELISA操作视频

|   ELISA操作前必读 / 下载