利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇(FC)和游离脂肪酸(FFA),从而把胆固醇酯转化为 FC;进一步利用胆固醇氧化酶催化FC 氧化,生成4-胆甾烯酮和 H2O2;最后利用过氧化物酶催化 H2O2氧化4-氨基安替比林和ESPAS,生成蓝紫色醌亚胺化合物,其在 546nm 有特征吸收峰,其颜色深浅与TC含量成正比。