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牛诱导型NO合酶(iNOS)ELISA试剂盒

英文名称:Bovine iNOS ELISA Kit
实验类型:夹心法
检测范围:0.625 ng/mL – 20 ng/mL
最低检测限:0.1 ng/mL
应用范围:血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体(本产品仅供实验室科研及非临床用途)
产品介绍
实验目的/有效期 实验原理 ELISA试剂盒组成
样本处理及要求 需要而未提供的试剂和器材 试剂准备
操作步骤 注意事项 洗板方法
实验结果计算 ELISA试剂盒性能  

 

牛诱导型NO合酶(iNOS)ELISA试剂盒仅供研究使用

 

牛诱导型NO合酶(iNOS)ELISA试剂盒实验目的


本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中牛诱导型NO合酶(iNOS)的含量。

有效期:6个月

保存条件:2-8℃

 

 

 

实验原理


试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被牛诱导型NO合酶(iNOS)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛诱导型NO合酶(iNOS)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

 

 

 

牛诱导型NO合酶(iNOS)ELISA试剂盒组成


试剂盒组成96孔配置48孔配置备注
微孔酶标板 8孔×12条 8孔×6条  无
标准品 0.3mL×6管 0.3mL×6管
样本稀释液 6mL 3mL
检测抗体-HRP 10mL 5mL
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物A 6mL 3mL
底物B 6mL 3mL
终止液 6mL 3mL
封板膜 2张 2张
说明书 1份 1份
自封袋 1个 1个

备注:

1. 标准品浓度依次为:20、10、5、2.5、1.25、0 ng/mL

2. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

 

 

 

样本处理及要求


1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

 

 

 

需要而未提供的试剂和器材


1. 酶标仪(450nm)

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

 

 

 

试剂准备


试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

 

 

 

操作步骤


1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

 

 

注意事项


1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

 

 

 

洗板方法


手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

 

 

 

实验结果计算


以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。

Elisa试剂盒标准曲线图

(此图仅供参考)

 

 

 

牛诱导型NO合酶(iNOS)ELISA试剂盒性能


1. 检测范围:0.625 ng/mL – 20 ng/mL。

2. 灵敏度:最低检测浓度小于0.1 ng/mL。

3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。

 

 

产品关键字:牛诱导型NO合酶(iNOS)ELISA试剂盒 牛诱导型NO合酶 ELISA试剂盒 牛(iNOS)ELISA试剂盒

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